手提式高压灭菌锅使用方法如下：将内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量水,使水面与三角搁架相平为宜，加水不能太少,否则会引起烧干或者爆裂，加去离子水或蒸馏水,产生水垢少,锅体不容易被腐蚀；放回灭菌桶,并装入待灭菌物品，将准备灭菌培养基及空玻璃器皿用牛皮纸包好,装入锅内套层中,物品放置不宜过多,过挤,锅内应留出三分之一空间，以免防碍蒸汽流通影响灭菌效果，三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口纸而透入棉塞；加盖,并将盖上排气软管插入内层灭菌桶排气槽内，然后盖严锅盖,采用对角式均匀拧紧锅盖上螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气；用电炉或煤气加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内冷空气，待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内温度随蒸汽压力增加而逐渐上升，当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间,停止加热，当温度下降时,再开启电源开始加热,使温度维持在恒定范围之内，温度太低达不到灭菌效果,太高可能会出危险；灭菌所需时间到后,切断电源或关闭煤气,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表压力降至0时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,10分钟后取出灭菌物品，若压力未降到0时,打开排气阀,会因锅内压力突然下降,使容器内液体由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成棉塞沾染培养基而发生污染。